Explorando la Agregación Plaquetaria: Dudas Comunes y Respuestas Científicas

Introducción

La agregometría por transmisión de luz (LTA, por sus siglas en inglés) se considera como la prueba estándar de oro y actualmente es el ensayo más utilizado para la evaluación de los defectos de la función plaquetaria hereditarios o adquiridos. Esta técnica fotométrica mide la agregación de las plaquetas en plasma citratado rico en plaquetas (cPRP) después de agregar diferentes agonistas (agentes activadores de plaquetas). Las preguntas de futuros usuarios potenciales de técnica son numerosas y recurrentes, a menudo, relacionadas con la falta de conocimiento de la prueba de agregación plaquetaria.mencionando como más frecuentes las siguientes:

1. ¿Hay diferencias en las señales de las curvas de agregación?

Las diferencias en los perfiles de la curva de agregación se deben, con mayor frecuencia, al tipo de agregómetro, tipo de registro de señal, detección de altura de señal, tipo de barras agitadoras y software de procesamiento de datos utilizado. Fig. 1 y 2.

¿Deben rechazarse sistemáticamente los plasmas hemolizados, ictéricos y lipémicos (HIL)?

Se aceptarían muestras hemolizadas con una concentración de hemoglobina de glóbulos rojos de hasta 5 g/L (RBCH). Las muestras con una concentración de RBCH más alta también podrían seguir utilizándose con el uso de apirasa. La agregación plaquetaria inducida por ADP o colágeno en muestras ictéricas no se vió afectada por concentraciones crecientes de bilirrubina de hasta 400 mg/mL. La agregación plaquetaria inducida por ADP o colágeno en muestras lipémicas parecía comparable al control hasta 1,5 g/L de lípidos (triglicéridos). Por encima de esta concentración, la agregación plaquetaria era ilegible debido a los límites infrarrojos en las muestras turbias.

3. ¿Control del día o intervalos de referencia?

En ausencia de un control de calidad externo para LTA, lo ideal es que se tome una muestra de sangre de un sujeto sano utilizado como control del día al mismo tiempo que la muestra del paciente. Este control permitirá evaluar el correcto funcionamiento del agregómetro. Sin embargo, la obtención de una muestra de sangre para un control diario es a menudo complicada porque algunos laboratorios están muy lejos del lugar de la toma de muestra, lo que repercute en el tiempo necesario para realizar las pruebas de LTA. Otra solución que se utiliza a menudo es que cada laboratorio defina sus propios intervalos de referencia, que varían según el tipo de agonista y su concentración y especialmente en caso de uso de un agonista débil como el ADP a 2 uM.

Para el caso de los intervalos de referencia, el método estadístico utilizado dependerá del número de donantes (n) incluidos:

Parámetro de resultado: Media de agregación (%) ±2 DE

n=120, prueba no paramétrica (Horowitz, GL, 2010) 

60<n<80, media robusta (Horn PS, 2003), software MedCalc®

n=20, comprobación de intervalos de referencia publicados utilizando métodos similares (instrumentos y condiciones preanalíticas, Horowitz GL, 2010)

Los intervalos de referencia se realizan para cada agonista en cada concentración.

4. ¿Qué agonista a qué concentración?

Opción 1: comenzar con el uso de agonista en una concentración baja, si la respuesta es anormal, aumentar la concentración del agonista.

Opción 2: realizar la prueba directamente en paralelo en concentraciones bajas y altas de agonista.

Opción 3: realizar la prueba en una sola concentración de cada tipo de agonista (Alessi, 2023)

5. Para un mismo tipo de agonista, ¿diferentes perfiles de agregación?

Actualmente, no se presta atención a la fuente del reactivo de agregación utilizado, lo que a veces da lugar a respuestas de agregación muy variables para un mismo tipo de agonista. Muchos fabricantes ofrecen estos reactivos, todos ellos con marcaje CE o FDA, sin hacer ninguna afirmación real sobre sus formulaciones y concentración. Como podemos ver aquí, para un mismo agonista ADP, de 3 fabricantes diferentes, utilizado a 2 uM, se obtuvieron diferentes perfiles de agregación y el control químico mostró diferencias en las concentraciones y los índices de pureza (estudio PLATELET en curso: comparación de los ocho reactivos ADP principales).

Conclusión

Como se ha descrito, se pueden encontrar soluciones para superar algunos de los obstáculos asociados a las condiciones preanalíticas y analíticas. A pesar de las limitaciones inherentes descritas aquí, la LTA sigue siendo la piedra angular de la investigación de la función plaquetaria como una opción valiosa en la primera línea para diagnosticar defectos que predisponen a los pacientes a síntomas hemorrágicos, alta reactividad plaquetaria en el riesgo trombótico cardiovascular y el seguimiento de los fármacos antiplaquetarios o en la medicina transfusional.