Técnica de adsorción alogénica, herramienta de gran ayuda cuando se sospecha de una mezcla de anticuerpos irregulares

Las pruebas que nos permiten detectar la presencia de anticuerpos irregulares de interés clínico forman parte de las pruebas pretransfusionales. Cuando se detecta la presencia de un anticuerpo irregular y se determina su especificidad, esta puede estar asociada a uno o varios anticuerpos. La posibilidad de encontrar un solo anticuerpo es mucho mayor comparada con la posibilidad de encontrar 3 o más anticuerpos. En un estudio reportado en el 2015 se estudiaron 92 muestras de las cuales el 73% contenían un anticuerpo, 16% dos anticuerpos y el 5% 3 o más anticuerpos5. La especificidad de los anticuerpos reportados pertenecen a los sistemas Rh, MNS, Kell, Duffy, Diego, Kidd principalmente, y las mezclas de anticuerpos varían pero particularmente están involucrados anticuerpos del sistema Rh. Las combinaciones más comunes para mezclas de tres anticuerpos son principalmente: anti-C + anti-E + anti-Jka, anti-E + anti-c + anti-Jka y anti-K1 + anti-Dia + anti-Fya. Otro estudio realizado en CMNXXI menciona que el porcentaje de encontrar una mezcla de 3 anticuerpos es alrededor del 0.81% en pacientes.

Para poder determinar la especificidad de cada anticuerpo en una muestra se requiere de conocimiento y uso de múltiples herramientas como paneles extendidos, paneles tratados con enzimas, técnicas de adsorción, elución y el empleo de reactivos químicos como el DTT, enzimas, difosfato de cloroquina, entre otros. La elección de la técnica a usar va a depender de la naturaleza del anticuerpo, si se trata de una IgM o si es una IgG, la temperatura de reacción y por supuesto de la cantidad de anticuerpos presentes en la misma.

Las técnicas de adsorción son de gran ayuda para la separación de una mezcla de anticuerpos

Una herramienta de gran utilidad y que tiene mucha aplicación, es la adsorción alogénica ya que permite realizar una excelente separación cuando existe una mezcla de anticuerpos, más aún si se sabe o sospecha de la especificidad de alguno de ellos.

Material y Métodos

Se utilizaron tarjetas DG Gel Coombs, DG Gel Pheno, DG Gel ABORh2D, DG Gel DC Scan, Panel Identisera Diana 11 de marca Grifols, anti suero anti-S marca Immucor y células de fenotipo conocido R1R1, R1RZ y rr. El procesamiento se realiza en los equipos Erytra y Wadiana de la marca Grifols conforme a los protocolos de estudio.

Datos Clínicos

Los datos del paciente hospitalizado con una anemia de grado II se muestran en la tabla 1, se solicitan tres concentrados eritrocitarios para transfundirlo.

Tabla 1

Pruebas y Resultados

La muestra se procesó conforme al protocolo establecido en el CEMT León, los resultados iniciales se muestran en la tabla 2.

Tabla 2

Al presentarse un rastreo de anticuerpos positivo se procede a realizar un panel de anticuerpos de 11 células.

Carta de panel Identisera Diana, Lote 21008, Grifols.

El resultado obtenido en este panel sugiere una mezcla de anticuerpos ya que se observan diferentes grados de aglutinación.

Se realiza la técnica de adsorción para poder separar la mezcla de anticuerpos empleando eritrocitos con el siguiente fenotipo R1R1, R1RZ y rr además se evalúa la presencia del antígeno S. Los resultados esperados de esta adsorción se muestran en la tabla 3.

Tabla 3

En esta tabla se muestra cuales son los anticuerpos que se espera sean adsorbidos y cuales quedarán libres en las alícuotas de suero adsorto

Los resultados obtenidos al correr los paneles de los sueros adsortos se muestran en la tabla 4.

Tabla 4

Resultados del corrimiento de panel de 11 células de los sueros adsortos

Se detecta la presencia de 3 anticuerpos un anti-c, anti-E, anti-S y se coteja con el fenotipo del paciente el cual es: R1R1 S-.

Discusión de los resultados

Al realizar las pruebas pretransfusionales se encuentra un rastreo de anticuerpos irregulares positivo con un autocontrol negativo lo que nos sugiere la presencia de aloanticuerpos.

Al realizar el panel de 11 células se observan diferentes grados de aglutinación. Inicialmente se sospechaba de la presencia de un anti-c y un anti-E ya que en las células 4 y 5 se observa un mayor grado de aglutinación, para poder comprobar la presencia o ausencia de estos anticuerpos se realiza técnicas de adsorción utilizando eritrocitos con los siguientes fenotipos R1R1 S+, R1RZ y rr, observándose; la presencia de dos anticuerpos un anti-c y un anti-E en las células R1R1 y rr.

Para el caso de los eritrocitos R1RZ S- y dado que el fenotipo indica la presencia de los antígenos E, C y e además de la ausencia del antígeno S, se busca adsorber el anticuerpo E, dejando libre en el suero el anti-c y anti-S. Esto se observa cuando se coteja la imagen de la carta del panel en donde la célula 6 presenta aglutinación, está célula marca la diferencia entre estos 2 anticuerpos (anti-S y el anti-c).

Para poder comprobar que efectivamente se trata de un probable anti-S se utilizan eritrocitos rr S-, con estos se realiza una adsorción para adsorber el anti-c dejando libre el anti-S y el anti-E, obteniendo la imagen correspondiente para estos dos anticuerpos, este suero adsorto se utilizó para ser nuevamente adsorbido con los eritrocitos rr S+ separando así estos anticuerpos, dejando el anti-E libre en el suero adsorto y el anti-S pegado a los eritrocitos.

La información obtenida nos indica la presencia de 3 anticuerpos, de estos anticuerpos dos pertenecen al sistema Rh, el anti-E y el anti-c y el anti-S al sistema MNS, estos anticuerpos adquieren importancia clínica por ser activos a 37 grados y en orden de frecuencia concuerda con lo reportado en la población mexicana.

La presencia de estos tres anticuerpos nos implicaría que la posibilidad de encontrar unidades compatibles con el fenotipo R1R1 S- se podría ver reducida, el hecho de que dos de los anticuerpos encontrados pertenezcan al sistema Rh facilita la selección de las unidades, ya que el fenotipo R1R1 (DCe/DCe) se encuentra reportado con una frecuencia del 26.4%, la presencia del fenotipo S- tiene una frecuencia del 18.8% para el fenotipo MNss y del 15.39% para el fenotipo MMss en la población mexicana, particularmente en la CDMX1, esto nos sugiere que por cada 10 donadores se encontrarían como mínimo entre 2 y 4 unidades con el fenotipo R1R1 S-.

Conclusión

Las técnicas de adsorción son de gran ayuda para la separación de una mezcla de anticuerpos, el hecho de tener tres anticuerpos implica seleccionar unidades con un fenotipo que nos permita llevar a cabo este proceso, y en donde por lo menos se debe conocer la especificidad de uno de los anticuerpos, en este caso el anti-E así como la sospecha del anti-c fueron de gran ayuda para poder determinar la presencia del anti-S.