La Evolución de la Genotipificación en la Inmunohematología en México

La investigación académica básica en Inmunohematología molecular, que comenzó alrededor de 1990 se pone en práctica hoy. El genotipado de glóbulos rojos es una tecnología mediante la cual se utilizan técnicas basadas en el ADN para evaluar sustituciones, deleciones, inserciones y conversiones de genes que determinan la expresión de antígenos eritrocitarios.

En el presente, la biología molecular aplicada en áreas de Inmunohematología en México, tiene un avance lento, la genotipificación de eritrocitos se realiza únicamente en dos instituciones: una pública y otra privada. La población en estudio son pacientes politransfundidos, con variantes en sistema Rh, anemias hemolíticas y discrepancias de grupo, entre otros. Actualmente, estos casos se resuelven mediante la Inmunohematología clásica empleando técnicas en tubo, gel o microplaca, por nombrar algunas. Existen bancos de sangre que cuentan con una mayor disponibilidad de reactivos para realizar algunas pruebas especiales, como son: Fenotipo extendido con empleo de antisueros raros para una transfusión “profiláctica”, cuidando los antígenos inmunodominantes (Rh, Kell, Duffy, Kidd, Diego y MNSs).

La expectativa en medicina transfusional de las tecnologías de genotipificación de eritrocitos es predecir el fenotipo, es decir; aumentar la disponibilidad y el grado de compatibilidad entre receptor y donador, lo que redunda en mejorar la atención y la seguridad particularmente para pacientes vulnerables con enfermedades hematológicas que requerirán transfusiones recurrentes y así evitar reacciones transfusionales hemolíticas agudas o retardadas.

Actualmente la utilidad clínica de esta tecnología es pertinente cuando los métodos tradicionales de hemaglutinación son difíciles o imposibles de realizar1, por ejemplo:

• Profilaxis de alosensibilización en condiciones crónicas dependiente de transfusión
• Panaglutinación o reactividad serológica inespecífica o confusa
• Falta de antisueros contra un antígeno sospechoso
• Determinación de subgrupos sanguíneos
• Buscar o confirmar fenotipos raros
• Caracterización genómica de los llamados fenotipos D parcial, D débil y de otros fenotipos Rh poco comunes.
• Genotipificación de Donador y Receptor en Trasplante de Médula Ósea
• Genotipificación en pacientes candidatos de soporte transfusional crónico
• Aporte transfusional en paciente recién transfundido y que además presenta una mezcla de aloanticuerpos.

La adopción generalizada de estas tecnologías, combinada con un régimen de pruebas de donantes a gran escala, predeciría el fenotipo eritrocitario y se podría genera un impacto inmediato en la eficiencia de la cadena de suministro de sangre, lo que puede dar como resultado una mejor atención y seguridad a los pacientes que lo requieran, y podrían optimizar tiempos en los procesos de transfusión, menores riesgos de aloinmunización y por ende, evitar las reacciones transfusionales hemolíticas retardadas2.

En el mercado, actualmente encontramos dos metodologías para diagnóstico in vitro que están aprobadas por la FDA de los Estados Unidos. Con base en los estudios realizados, se ha demostrado que estas no requieren confirmación mediante fenotipado serológico:

• PRECISE TYPE3 (Microarray Technology), que fue aprobado el 23 de mayo de 2014
• ID CORE XT4 (Suspensión Array Technology) aprobado el 11 de octubre del 2018.

Ambos predicen el fenotipo a través del genotipo mediante el estudio de polimorfismos de ADN seleccionados, utilizando sondas de oligonucleótidos alelo específicas, que permiten la detección de variantes alélicas que se diferencian en un único nucleótido (SNPs) o por la combinación de varios SNPs. Parten de la reacción en cadena de la polimerasa empleando multiplex para amplificar regiones específicas del ADN genómico extraído, seguido de hibridación con sondas en la superficie de perlas codificadas por colores o elongación con Dinucleótidos (dNTPs) marcados con fluorescencia.

El primer sistema utiliza para su lectura la microscopía de epifluorescencia, en tanto que el segundo emplea tecnología de luminex. La interpretación del genotipo y predicción del fenotipo se realiza empleando un software de análisis de imágenes patentado. Estas pruebas abarcan un promedio de 10 a 11 sistemas de grupos sanguíneos con 36 antígenos, cada uno de ellos son considerados clínicamente significativos. (Ver Tabla 1)

En LIMOGEN se utilizan ambas plataformas que han apoyado a diversos casos clínicos que presentaron dificultades en su resolución mediante técnicas serológicas, por ejemplo (tabla 2):

Sería ideal implementar en nuestro país un proceso de alto rendimiento con genotipificación de eritrocitos e integrar los datos con la base del inventario en toda la cadena de suministro de sangre, que podría contribuir a un suministro eficiente de unidades de glóbulos rojos.

La inmunohematología molecular viene a complementar los métodos serológicos tradicionales para resolver casos complejos, optimizando tiempo y recursos.

Su implementación en los Bancos de Sangre y Centros de Transfusión requiere mayor automatización y un acceso ágil a la información que permita aprovechar al máximo el potencial de esta tecnología. Implicando un modelo de asociación hospital-laboratorio de referencia que ofrezca el beneficio de una rápida integración de la medicina genómica actualizada, al mismo tiempo que respalda la economía de las operaciones centralizadas en laboratorios de referencia a gran escala5.

Esta tecnología ya es una realidad accesible que apoya y complementa a la Inmunohematología clásica en diversos centros de transfusión en Europa, Estados Unidos, Canadá, los Emiratos Árabes, Japón, China y Nueva Zelanda; en México, estamos iniciando nuestros primeros ensayos. Actualmente, menos del 0.5% de los casos apoyan su resolución con esta herramienta, la mayoría de estos se resuelven con pruebas serológicas. La genotipificación es una herramienta efectiva para dar respuesta a situaciones especiales y un mejor panorama a los pacientes que así lo requieran.