La electroforesis de proteínas en suero y orina resulta un análisis útil para investigar problemas sistémicos, por ejemplo, procesos inflamatorios, síndromes nefróticos, perfil cirrótico, etc., pero también permite el diagnóstico de enfermedades específicas donde existe afectación de las inmunoglobulinas (Igs), por ejemplo, la Gammapatía monoclonal de importancia incierta (MGUS), Smoldering Myeloma (SM) o Mieloma asintomático y, por supuesto, Mieloma Múltiple.

Las inmunoglobulinas implicadas en la respuesta inmune son sintetizadas por un tipo de leucocito denominado linfocito B y tienen un peso aproximado de 160 kDa. Cada Inmunoglobulina está constituido por dos unidades estructurales: 2 cadenas pesadas idénticas que determina la clase y 2 cadenas livianas idénticas de que determinan el tipo.

Existen 5 tipos de cadenas pesadas identificadas por letras griegas: IgA(α), IgD (δ), IgE (ε), IgG (γ) e IgM (μ) y 2 tipos de cadenas ligeras igualmente identificadas por letras griegas: Kappa (κ) y Lamba (λ), existen hasta 10 combinaciones posible que se pueden identificar o tipificar. Las imunoglobulinas migran en zona gamma en el corrimiento electroforético, aproximadamente el 85% de las Inmunoglobulinas corresponde a IgG, el 15% a IgA, el 5% a IgM y menos del 1% a IgD e IgE, observamos una forma gaussiana en esta fracción sin deformación o picos adicionales.

En caso de una neoplasia que afecte a la médula ósea particularmente a las células plasmáticas observaremos como consecuencia la proliferación de una inmunoglobulina (gammapatía monoclonal) o la proliferación de varias (gammapatía biclonal u oligoclonal). Se debe sospechosas de proteínas monoclonales (Proteínas-M, paraproteínas, inmunoglobulinas monoclonales) principalmente aquellas situadas en las fracciones de beta globulinas y de gamma globulinas (se pueden observar en baja prevalencia en zona alfa). En cualquiera de las circunstancias se deben cuantificar y, tipificar la cadena pesada y ligera por Inmunofijación o inmunotipificación.

La Inmunofijación (IF) es una técnica que permite que la separación de una proteína por electroforesis, posteriormente los antisueros son adicionados, difunden dentro del gel y precipitan los anticuerpos correspondientes en caso de estar presentes (cadena pesada y/o ligera); una prueba positiva permite observar al menos una banda homogénea en los diferentes carriles sin importar sea una cadena pesada, ligera o ambas.

La Inmunotipificación o inmunotipado (IT) es una técnica que permite mezclar la muestra con un antisuero específico en función de su movilidad electroforética, en un pH alcalino. La muestra migra a través del tubo capilar, la detección se realiza a 200 nm eliminando la necesidad de tinción y mejorando la precisión y resolución.

Una prueba positiva involucra la inmunosustracción de los componentes monoclonales sin importar sea una cadena pesada, ligera o ambas. La unión entre anticuerpo presente en la muestra y el antisuero presente en el reactivo genera un compuesto más pesado y de mayor carga negativa, provocando una migración más rápida migrando a un lado de la albúmina, por ello, desaparece el pico problema. La IT nos permite determinar hasta 12 pruebas/hora.

Se han realizado diferentes estudios para mostrar las similitudes y diferencias entre ambas metodologías, uno de los primeros estudios prospectivos se realizó por el Dr. Katzmann, donde se incluyeron 1,518 pacientes, se realizaron estudios de electroforesis de proteínas séricas en gel de agarosa y electroforesis capilar. La electroforesis en gel de agarosa tuvo una sensibilidad y especificidad de 91% y 99%, respectivamente, mientras que la electroforesis capilar dio resultados de 95% y 99%. La inmunotipación de las proteínas monoclonales se realizó por inmunofijación e inmunosustracción. La electroforesis capilar fue más sensible que la electroforesis en gel de agarosa para la identificación de proteínas monoclonales en suero. Además, el método de inmunosustracción resultó técnicamente más simple y automatizado que la inmunofijación y representa un enfoque adicional útil para inmunotipar proteínas monoclonales.

En 2016 el Dr. Kanji Miyazaki y Dr. Kenshi Suzuki evaluaron diferentes pruebas en el que se incluyó IT e IF para determinar la mejor alternativa para detectar y tipificar las proteínas monoclonales en suero en pacientes con amiloidosis (AL). Se incluyeron 50 pacientes diagnosticados, 17 nuevos diagnósticos (con bandas muy pequeñas) y 33 pacientes que iniciaron tratamiento. Se demostró que la IT permitió diagnosticas más casos en comparación a la IF, se pueden combinar varias metodologías para mejorar la sensibilidad. Los resultados de la IT dependen de la interpretación por tanto es importante el entrenamiento y de la experiencia por parte del operador.

Las conclusiones de los diferentes estudios demuestran que la inmunotipificación (IT) e inmunofijación (IF) nos permiten tipificar las gammapatías monoclonales de acuerdo a su cadena pesada y ligera. La IT nos ofrece una excelente resolución y buen límite de detección en comparación a la IF que provee una excelente sensibilidad y buena resolución.

Finalmente, considere que la IT nos ofrece una automatización completa del análisis, incrementar la cantidad de pruebas por hora, nos permite reducir la manipulación por parte del operador y por ende mejorar los tiempos de entrega de resultados.