EP06A2
¿Qué es lo nuevo en esta edición?

La segunda edición de la EP06-A2 “Evaluación de la linealidad de los procedimientos de medida cuantitativos” de la Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), ofrece métodos más simples para el establecimiento y verificación de los intervalos de la linealidad. Esta nueva edición, también contiene un cambio en el análisis de datos, el cual se basa en las desviaciones clínicamente aceptables de la linealidad, en lugar de estrictos criterios estadísticos.

Tabla 1: Principales diferencias entre la edición EP06-A y la EP06-A2.

Validación de la Linealidad - Aplicable a fabricantes y desarrolladores

Validación de la evaluación de los datos de linealidad

El capítulo tres de la nueva edición está dedicado a la validación de la linealidad. Mientras que el EP06-A presenta un diseño experimental similar, el método de evaluación de datos es diferente. Este fue diseñado para determinar si la trayectoria de las medias de los datos están más cerca de una línea recta que una curva cuadrática o cúbica.

La nueva edición incluye el criterio para el Assessing Deviations from Linearity “ADL” (desviación de la linealidad tolerable), la cual puede ser dependiente de la concentración. También se adecúa con la idea de que, para la linealidad, la trayectoria relevante es aquella línea recta que pasa a través del “cero” y los resultados de las muestras del procedimiento de medida son directamente proporcionales al valor verdadero del mensurando en la muestra (EP06-A2 2020), el cual se representa como la media de los resultados de R de la muestra ≈k (valor verdadero del mensurando).

Sí resulta complicado obtener muestras de pacientes con concentraciones altas, pueden ser consideradas otro tipo de muestras, como aquellas enriquecidas. En caso contrario, se pueden obtener especímenes libres del mensurando (muestras blanco) e incluso considerar el uso de un diluyente libre del mensurando, siempre y cuando se compruebe su conmutabilidad.

Se recomienda ampliamente el análisis de regresión lineal para ajustar la línea recta a los datos, ya que reduce aún más la probabilidad de falla por errores aleatorios, los casos donde el procedimiento de medida muestre una desviación estándar (DE) más o menos constante a lo largo de su intervalo de medición analítica, suelen ser una excepción.

Condiciones experimentales de la validación de la linealidad

La validación requiere más muestras, más niveles de concentración y más replicados que la verificación. Una serie de muestras con concentraciones relacionadas en diferentes niveles, usualmente establecidas por dilución o provenientes de especímenes de concentración conocida, también son requeridas.

Las muestras deben ser similares a la naturaleza de las muestras de pacientes utilizadas en la rutina y libres de interferencias conocidas, las cuales se declaran en las instrucciones del procedimiento de medida. Cuando estas condiciones no se cumplen, el reporte final debe especificar el tratamiento realizado a las muestras o el tipo de matriz de estas, utilizadas en la evaluación. Si múltiples tipos de matrices son ensayadas en la rutina del laboratorio, el estudio del intervalo de linealidad debe realizarse para cada tipo de muestra, en la medida de lo posible.

Verificación de la linealidad para usuarios finales en el laboratorio

Verificación de la linealidad: medición y comparación

El enfoque en la nueva edición, involucra mediciones por duplicado de cinco o seis muestras con concentraciones que abarcan el intervalo lineal declarado, los resultados son entonces comparados con los valores predictivos de las muestras, establecidos por medio del análisis de regresión ponderada y la ADL (Assessing Deviations from Linearity - Desviación de la Linealidad Tolerable) contra el criterio de aceptación.

Las muestras para la verificación de la linealidad en un laboratorio clínico, generalmente provienen de tres fuentes:

• Del fabricante del procedimiento de medida.
• Del mismo laboratorio (muestras de pacientes individuales o pooles con concentraciones apropiadas para ser utilizadas como muestras ALTAS y BAJAS).
• Un tercero (tercera opinión), comúnmente de un proveedor de Ensayos de proficiencia o evaluación externa de la calidad (PT/EQA: Proficiency testing/External Quality Assessment), destinados a la evaluación de la linealidad con diferentes procedimientos de medida.

El volumen de las muestras debe ser suficiente para llevar a cabo al menos 2 mediciones en cada una. Cuando las muestras son suministradas por el fabricante o un tercero (tercera opinión), idealmente, éstas vienen acompañadas de valores de concentración asignados. Sin embargo, basta que el laboratorio conozca la concentración relativa de las muestras.

Para las primeras dos fuentes, los límites que deben verificarse son específicos del procedimiento de medición. Cuando el laboratorio está verificando el intervalo lineal declarado por el fabricante, este normalmente coincide con el intervalo lineal analítico establecido. En el tercer escenario, es probable que los límites de las muestras reflejen, ya sea el desempeño clínico necesario, o el desempeño de procedimientos de medición considerados aceptables en laboratorios clínicos de rutina. El intervalo que necesita ser verificado podría ser más limitado que los intervalos de linealidad de los fabricantes.

Análisis de regresión en la verificación de la linealidad

Un cambio notable es el uso de la regresión de mínimos cuadrados ponderados para el análisis. Cuando la desviación estándar de repetibilidad del procedimiento de medida es claramente dependiente de la concentración, la ponderación evita que las muestras de alta concentración tengan una influencia desproporcionada en el ajuste de la línea recta de los datos del estudio de la linealidad.
Idealmente, el intervalo de la linealidad declarado por el fabricante, incluye las concentraciones de las muestras BAJA y ALTA, las cuales suelen empatar con el Límite Inferior del Intervalo Lineal (LLLI) y el Límite Superior del Intervalo Lineal (ULLI) declarados en el procedimiento de medida. Es esencial que los resultados obtenidos de las muestras se reporten explícitamente con valores numéricos, y evitar resultados expresados como “mayor que” o “menor que” en una concentración base.

Verificación de la linealidad

Desviación permitida de la linealidad

Determinar las ADL (Desviación de la Linealidad Tolerable) es un paso crítico en la verificación de la linealidad, ya que es un componente del error sistemático, la ADL no debe ser mayor que una fracción del sesgo permitido aunque no hay relación consistente entre la ADL y el Error Total Permitido (TEa%). Es inusual que la ADL (desviación de la linealidad tolerable) sea superior al 50% del TEa%; las ADL altas, como un nivel que supera el 50% de TEa%, deben ser soportadas mediante una justificación explícita.

La ADL debe especificarse en un formulario aplicable a cada una de las muestras. Dependiendo del procedimiento de medición o del mensurando y el uso clínico previsto de la prueba, la ADL puede ser un valor fijo constante, en unidades apropiadas para el mensurando (por ejemplo 0.3 ng/L); un valor relativo (por ejemplo, 6%) o alguna combinación (por ejemplo, la mayor de 0.3 ng/L o 6%).

Cuando se necesita más de una corrida para completar todas las mediciones, se recomienda que cada muestra sea representada en cada corrida. Debido al número limitado de muestras y réplicas, no se recomienda realizar pruebas de valores atípicos o de repetibilidad. Sin embargo, el laboratorio puede realizar una verificación informal de la integridad de los datos a través de un resumen tabular simple y un diagrama de dispersión de los datos (media, desviación estándar (DE) y coeficiente de variación (CV%)).

Un pequeño número de grados de libertad de cualquier grupo único, crea una gran cantidad de incertidumbre en la Desviación Estándar (DE) localizada. Para crear una estimación más confiable de la desviación estándar, un perfil de precisión (modelo lineal de la DE de las réplicas para cada grupo frente al valor medio del mensurando), es necesario.

Normalmente, se supone que un procedimiento de medición tiene un % de Coeficiente de Variación (CV) relativamente constante a lo largo del intervalo de medición lineal.
Sin embargo, existe un rango a medida que los valores se aproximan a cero, en el que el CV % comienza a aumentar rápidamente.

Conclusiones

Los nuevos procedimientos EP06A2 reflejan las realidades de evaluar la linealidad en los laboratorios de hoy ofreciendo a los fabricantes y usuarios finales una mayor flexibilidad para una variedad de escenarios con la intención de mejorar la confianza en los datos. Existen paneles listos para utilizarse en la evaluación de la linealidad y calibración, los cuales son de la más alta calidad, fáciles de usar e increíblemente eficientes.